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    公司動態

    分子生物學常用試劑的配制


    以下實驗中所用試劑耗材均可聯系創賽進行咨詢購買,請撥打專線4006087598。


    1.LB(Luria-Bertani)培養液、平板的配制

    配制每升LB培養液,應在950ml去離子水中加入:
    **培養用酵母提取物(bacto-yeastextract) 5g
    **培養用胰化蛋白胨(bacto-tryptone)10g
    NaCl 10g
    搖動容器直至溶質完全溶解,用5mol/LNaOH(約0.2ml)調節pH值至7.0,加入去離子水至總體積為1L,在 15 1bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽** 20min。
    LB 瓊脂平板的配制:
    先按上述配方配制液體培養基,臨高壓**前加入瓊脂糖 15g /L,同法高壓蒸汽** 20min。從高壓**器取出培養基時應輕輕旋動以使熔解的瓊脂糖能均勻分布于整個培養基溶液中,應使培養基降溫至50℃時,加入***等不耐熱的物質。為避免產生氣泡,混勻培養基時應采取旋動的方式,然后可直接從燒瓶中傾出培養基鋪制平板。90mm直徑的培養皿約需30-50ml培養基,培養基完全凝結后,應倒置平皿并貯存于4℃備用。

    2.瓊脂糖凝膠的配制
    根據所需凝膠的濃度秤取瓊脂糖,加入相應電泳緩沖液中,用微波爐加熱煮沸至瓊脂糖完全溶解,加入適量 EB 混勻,適當冷卻后傾入凝膠鑄槽中,插入梳子,凝膠厚度不超過梳孔,如有氣泡產生則用玻璃棒驅除,不能過早拔除梳子,應待凝膠完全凝結后才能拔除梳子。

    3.P1、P2、P3的配制

    P1 的配制在 800ml 去離子水中溶入 Tris 堿 6.06g,Na2EDTA?2H2O 3.72g,用 HCl 調整 pH 至 8.0,用去離子水調整容積至1升,每升P1內加入RNaseA100mg。

    P2 的配制:在 950ml 去離子水中溶入 NaOH 8.0g,20%SDS 50ml,調整容積至 1 升。
    P3 的配制:在 500ml 去離子水中溶入醋酸鉀 294.5g,用冰醋酸調整 pH 值至 5.5,用去離子水調整容積至1升。

    4.常用緩沖液:
    TE
    pH 7.4
    10mmol/LTris?Cl (pH7.4)
    1mmol/L EDTA(pH8.0)
    pH 7.6
    10mmol/LTris?Cl (pH7.6)
    1mmol/L EDTA(pH8.0)
    pH 8.0
    10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
    1mmol/L EDTA(pH8.0)
    STE(亦稱 TEN)
    0.1mmol/L NaCl
    10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
    1mmol/L EDTA(pH8.0)
    STET
    0.1mmol/L NaCl
    10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
    1mmol/L EDTA(pH8.0)
    5%Triton X-100
    TNT
    10mmol/LTris?Cl (pH8.0)
    150mmol/L NaCl
    0.05% Tween 20
    電泳緩沖液

    Tris-乙酸(TAE):50×濃貯存液(每升):242g Tris 堿


    5   7.1ml 冰乙酸
    100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)使用時再稀釋50倍。
    Tris-磷酸(TPE):10×濃貯存液(每升):108g Tris 堿
    15.5ml 85%磷酸(1.679g /ml)
    40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
    使用時再稀釋10倍。
    Tris-硼酸(TBE):5×濃貯存液(每升):54g Tris 堿
    27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) 使用時再稀釋10倍。
    堿性緩沖液:1×使用液(每升):5ml10mol/L NaOH
    2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)
    Tris-甘氨酸:5×濃貯存液(每升):15.1g Tris 堿
    94g 甘氨酸(電泳級)(pH8.3)
    50ml 10%SDS(電泳級)
    2×SDS 凝膠加樣緩沖液
    100mmol/L Tris?HCl(pH6.8)
    200mmol/L 二硫蘇糖醇(DTT)
    4%SDS(電泳級)
    0.2%溴酚藍
    20%甘油
    30%丙烯酰胺:
    將29g 丙烯酰胺和1gN,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中,加熱至37℃溶解之,補加
    水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45孔徑)過濾**查證該溶液的pH值應不大于7.0,置棕色瓶中保存于室溫。
    10mol/L 乙酸銨:把770g 乙酸銨溶解于800ml水中,加水定容至1L后過濾**。

    1mol/LCaCl2:在200ml純水中(Milli-Q水或相當級別的水)溶解54gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過濾**,分裝成10ml小份貯存于-20℃。
    2.5mol/LCaCl2:在20ml蒸餾水中溶解13.5gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過濾**,分裝成1ml小份貯存于-20℃。
    1mol/L 二硫蘇糖醇(DTT):用20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,過濾**后分裝成1ml小份貯存于-20℃。
    0.5mol/LEDTA(pH8.0):在 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?H2O),在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調節溶液的pH至8.0,然后定容至1升,分裝后高壓**備用。
    溴化乙錠(10mg/ml):在100ml水中加入1g 溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其完全溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保存于室溫。

    1mol/LMgCl2:
    在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O,用水定容至1升,分裝成小份并高壓**備用。

    酚:氯仿:
    把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液層,保存于4℃。

    磷酸緩沖鹽溶液(PBS):
    在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl調節溶液的pH 值至 7.4,加水定容至 1 升,高壓蒸汽** 20min。保存于室溫。
    乙酸鉀溶液(用于堿裂解):
    在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度5mol/L的溶液。
    3mol/L 乙酸鈉(pH5.2 和 7.0):
    在800ml水中溶解408.1g 三水乙酸鈉,用冰乙酸調節pH值至5.2或用稀乙酸調節pH至7.0,加水定容至1升,分裝后高壓**。
    1mol/LTris:
    在800ml水中溶解121.1gTris堿,加入濃HCl調節pH至所需值。
    pH HCl
    7.4 70ml
    7.6 60ml
    8.0 42ml
    應使溶液冷至室溫后方可*后調定pH值,加水定容至1升,分裝后高壓**。

    Tris 緩沖鹽溶液(TBS):
    在800ml蒸餾水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris堿,加入0.015酚紅并用HCl調pH值至7.4,用蒸餾水定容至1升,分裝后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高壓下蒸汽**20分鈡,于室溫保存。

    5mmol/LNH4Ac 溶液:
    秤取乙酸銨192.7g,加重蒸水250ml混勻,加重蒸水定容至500ml,1.1kg/cm2**20min。

    10mg/mlBSA(小牛血清白蛋白)溶液:
    秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml**重蒸水中。置4℃冰箱貯存備用。

    10%十二烷基硫酸鈉(SDS):
    在900ml水中溶解100g 電泳級SDS,加熱至68℃助溶,加入幾滴濃鹽酸調節溶液的pH值至7.2,加入水定容至1L,分裝備用。

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