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    公司動態

    酸性磷酸酶的顯示方法實驗步驟介紹


    實驗試劑

    1.  10%中性福爾馬林(pH6.8~7.1)甲醛 10ml 蒸餾水 90ml 醋酸鈉 2g
    2.  酸性磷酸酶作用液
    蒸餾水 90ml 0.2mol/L醋酸緩沖液(pH4.6) 12ml 5%硝酸鉛 2ml
    3.  2%β—甘油磷酸鈉 4ml
    先將蒸餾水和醋酸緩沖液混合,隨后分成大致相等的兩份,一份中加硝酸鉛溶液,另一份加甘油磷酸鈉溶液,然后再將兩者緩緩混合,邊混邊攪勻后若酸堿度值不到pH5.0,可加少量醋酸的調整。此作用液*好在臨用前配制,不能貯存。配好后的作用液應透明無絮狀懸浮物和沉淀,否則將嚴重影響實驗結果。
    4.  1%硫化胺溶液
    硫化胺 1ml 蒸餾水 9ml
    5.  姬姆薩染液(1:30)
    姬姆薩原液 3滴 磷酸鹽緩沖液(pH6.8) 5ml
    6.  6%淀粉肉湯
    牛肉膏 0.3g 蛋白胨 1.0g 氯化鈉 0.5g 蒸餾水 100ml

    高壓**9.9×104pa(15磅)20min,再加入可溶性淀粉6g,水溫浴,促使溶解后置冰箱保存備用。


    實驗步驟

    1. 取小白鼠一只,每日腹腔注射6%淀粉肉湯1ml,連續注射三天。
    2. 在第三天注射后3~4h,再向腹腔注射生理鹽水1ml,過3min后在原注射部位抽取腹腔液0.1~0.2ml。請注意!注射和抽液的進針部位和深度要保持一致。否則可能抽不出腹腔液。
    3. 將腹腔液滴在預冷的載玻片上,每片1~2滴,涂片,將玻片垂直插入玻片架,迅速放到冰箱內(4℃),讓細胞自行鋪展。
    4. 30min后,將玻片轉入10%中性福爾馬林,冰箱內4℃固定30min。
    5. 自來水漂洗5min,把水甩干。
    6. 轉入酸性磷酸酶作用液中,37℃處理30min。
    7. 自來水漂洗片刻。
    8. 1%硫化胺處理3~5min。
    9. 自來水沖洗,甩干。
    10.用1∶30的姬姆薩染液染色15min。
    11.自來水沖去染液,用磷酸鹽緩沖液臨時封片,鏡檢。
    12.對照實驗:
    將第3步的腹腔液涂片置50℃溫箱中處理30min,使酶失活,再進行6~11步的同樣實驗。

    滬公網安備 31011402005168號

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